Este tampón se usa para la separación por electroforesis del ADN
El tampón TBE es particularmente útil para la separación de fragmentos de ADN más pequeños (PM <1000), tales como productos pequeños de digestiones de enzimas de restricción .
TBE tiene una mayor capacidad de almacenamiento en búfer y proporcionará una resolución más nítida que el búfer TAE . El tampón TAE es una solución compuesta por Tris base, ácido acético y EDTA (Tris-acetato-EDTA).
El TBE es generalmente más costoso que el TAE e inhibe la ADN ligasa, lo que puede causar problemas si se desean pasos posteriores de purificación y ligación del ADN. Con los tres sencillos pasos que siguen, aprende a hacer un buffer TBE. No debería tomar más de unos 30 minutos para crear este buffer. Así es cómo:
Prepare una solución madre de EDTA
Una solución de EDTA (ácido etilendiaminotetraacético) debe prepararse antes de tiempo. EDTA no se diluirá completamente hasta que el pH se ajuste a aproximadamente 8.0. Para una solución madre de 500 mililitros de EDTA 0,5 M, pese 93,05 gramos de sal disódica de EDTA (FW = 372,2). Luego disuélvelo en 400 mililitros de agua desionizada y ajuste el pH con NaOH. Después de eso, completa la solución a un volumen final de 500 mililitros.
Prepare una solución madre de TBE
Haga una solución madre concentrada (5x) de TBE pesando 54 g de base Tris (FW = 121.14) y 27.5 g de ácido bórico (FW = 61.83) y disolviéndolos en aproximadamente 900 mililitros de agua desionizada. Luego agregue 20 mililitros de EDTA 0.5 M (pH 8.0) y ajuste la solución a un volumen final de 1 litro.
Esta solución puede almacenarse a temperatura ambiente, pero se formará un precipitado en soluciones antiguas. Guarde el tampón en botellas de vidrio y deseche si se ha formado un precipitado.
Prepare una solución de trabajo de TBE
Para la electroforesis en gel de agarosa, se puede usar un tampón TBE a una concentración de 0.5x (dilución 1:10 del material concentrado). Diluya la solución madre en 10x en agua desionizada. Las concentraciones finales de soluto son Tris-borato 45 mM y EDTA 1 mM. El buffer está ahora listo para usar en la ejecución de un gel de agarosa .
Que necesitas
Para hacer un buffer TBE, necesitarás solo cuatro sustancias. Los elementos restantes en esta lista son equipos. Las cuatro sustancias requeridas son sal disódica EDTA, base Tris, ácido bórico y agua desionizada.
En cuanto a los equipos, necesitará un medidor de pH y estándares de calibración, según corresponda. Además de eso, necesitarás vasos o frascos de 600 mililitros y 1500 mililitros. Redondeando las necesidades de su equipo son cilindros graduados y barras de agitación y placas de agitación.
Verifique el inventario en el laboratorio que va a utilizar para asegurarse de tener todo lo que necesita antes de comenzar. No hay nada peor que tener que parar en el medio de preparar una solución porque te has quedado sin los materiales adecuados.
Si su laboratorio está en la escuela o en su sitio de trabajo, verifique con el personal adecuado para ver si tienen todos los artículos en el inventario. Hacerlo puede ahorrarle tiempo y energía al final.