Cómo hacer este tampón de tinción inmunohistoquímico
La solución salina tamponada con fosfato (PBS) es una solución tampón que se usa comúnmente para la tinción inmunohistoquímica (IHC) y se usa a menudo en investigaciones biológicas. PBS es una solución de sal a base de agua que contiene hidrogenofosfato de sodio, cloruro de sodio y, en algunos casos, cloruro de potasio y dihidrogenofosfato de potasio.
Tinción inmunohistoquímica
La inmunohistoquímica se refiere al proceso de detección de antígenos tales como proteínas en las células de una sección de tejido mediante el uso del principio de anticuerpos que se unen específicamente a antígenos en tejidos biológicos.
La tinción inmunofluorescente fue el primer método de tinción inmunohistoquímica.
Los antígenos se vuelven visibles cuando se conjugan con anticuerpos usando tintes de fluorescencia debido a una reacción de unión antígeno-anticuerpo. Este proceso ocurre cuando se activa al excitar la luz de una longitud de onda específica bajo un microscopio de fluorescencia.
La osmolaridad y las concentraciones de iones de las soluciones coinciden con las del cuerpo humano; son isotónicas.
Una receta para PBS
Puedes preparar PBS de varias maneras. Hay múltiples formulas Algunos de ellos no contienen potasio, mientras que otros contienen calcio o magnesio .
Esta receta es relativamente fácil. Es para una solución madre de 10X PBS (0.1M). Sin embargo, también puede hacer una solución madre 1X, o comenzar con esta receta 10X y diluirla en 1X.
Todo el proceso toma alrededor de 10 minutos.
También se proporciona una opción para agregar Tween.
Lo que necesitará para hacer el buffer de PBS
- Fosfato de sodio monobásico (anhidro)
- Fosfato de sodio dibásico (anhidro)
- Cloruro de sodio
- Escalar y pesar barcos
- Agitador magnético y barra de agitación
- Una sonda de pH que está calibrada y soluciones apropiadas para ajustar el pH
- Matraz volumétrico 1L
- Tween 20 (opcional)
Cómo hacer una solución salina tamponada con fosfato (PBS)
Pesar 10,9 g de fosfato de sodio anhidro dibásico (Na2HPO4), 3,2 g de fosfato de sodio anhidro monobásico (NaH2PO4) y 90 g de cloruro de sodio (NaCl).
Disuelva en poco menos de 1 litro de agua destilada.
Ajuste el pH a 7.4 y haga que la solución alcance un volumen final de 1L.
Diluya 10 veces antes de usar y reajuste el pH si es necesario.
Puede hacer una solución de PBS que contenga 0.5 por ciento de Tween 20 agregando 5mL de Tween 20 a la solución de 1L.
Consejos para hacer el buffer de PBS
Almacene el búfer a temperatura ambiente después de haber hecho la solución de PBS.
Los reactivos no anhidros pueden ser sustituidos, pero tendrá que volver a calcular la masa apropiada de cada uno para acomodar las moléculas de agua agregadas.
Usos de solución salina tamponada con fosfato (PBS)
La solución salina tamponada con fosfato tiene muchos usos porque es isotónica y no tóxica para la mayoría de las células. Se puede usar para diluir sustancias y a menudo se usa para enjuagar contenedores de células. El PBS se puede usar como diluyente en varios métodos para secar biomoléculas porque las moléculas de agua que contiene se estructurarán alrededor de la sustancia-proteína, por ejemplo. Se "secará" e inmovilizará en una superficie sólida.
El pH permanece constante y constante para evitar la destrucción de las células.
La delgada película de agua que se une a la sustancia evita la desnaturalización u otros cambios conformacionales. Los tampones de carbonatos se pueden usar para el mismo propósito pero con menos efectividad.
El PBS también se puede usar para tomar un espectro de referencia cuando se mide la adsorción de proteínas en la elipsometría.