Este buffer se usa para estudiar el movimiento del ADN
Este buffer tiene una baja fuerza iónica y baja capacidad de buffering. Se adapta mejor a la electroforesis de piezas de ADN grandes (> 20 kb) y deberá sustituirse con frecuencia o recircularse durante períodos de tiempo de gelificación más largos (> 4 h).
Con eso en mente, es posible que desee considerar varios lotes del búfer.
Dado que el almacenamiento intermedio es fácil de realizar y los pasos se pueden llevar a cabo rápidamente, hacer más de un lote a la vez no debería ser particularmente lento o difícil de lograr. Usando las instrucciones a continuación, debería tomar solo 30 minutos para hacer el buffer TAE. Así es cómo:
Prepare una solución madre de EDTA
Una solución de EDTA (ácido etilendiaminotetraacético) se prepara antes de tiempo. EDTA no entrará completamente en una solución hasta que el pH se ajuste a aproximadamente 8.0. Para una solución madre de 500 mililitros de EDTA 0,5 M, pese 93,05 gramos de sal disódica de EDTA (FW = 372,2). Disuelva en 400 mililitros de agua desionizada y ajuste el pH con hidróxido de sodio (NaOH). Rellene la solución hasta un volumen final de 500 mililitros.
Batir una solución de TAE
Prepare una solución madre concentrada (50x) de TAE pesando 242 gramos de Tris base (FW = 121.14) y disolviéndolo en aproximadamente 750 mililitros de agua desionizada.
Con cuidado, agregue 57.1 mililitros de ácido glacial y 100 mililitros de EDTA 0.5 M (pH 8.0). Después de eso, ajuste la solución a un volumen final de 1 litro. Esta solución madre puede almacenarse a temperatura ambiente. El pH de este buffer no está ajustado y debería ser de aproximadamente 8.5.
Prepare una solución de trabajo de TAE
La solución de trabajo del tampón TAE 1x se fabrica simplemente diluyendo la solución madre en 50x en agua desionizada.
Las concentraciones finales de soluto son 40 mM. Tris-acetato y EDTA 1 mM. El buffer está ahora listo para usar en la ejecución de un gel de agarosa.
Lo que necesitas para el buffer
Como hacer que el buffer TAE solo requiera un conjunto rápido y simple de instrucciones, la cantidad de materiales necesarios no es excesiva. Solo necesitará EDTA sal disódica, base Tris y ácido acético glacial.
Hacer el buffer también requiere un medidor de pH y estándares de calibración, según corresponda. También necesitará recipientes o matraces de 600 mililitros y 1500 mililitros, así como cilindros graduados. Finalmente, necesitará agua desionizada, barras de agitación y placas de agitación.
Terminando
¿Dónde planeas hacer el buffer - en un sitio escolar, un sitio de trabajo u otro lugar, como tu casa? Verifique el inventario antes de comenzar a asegurarse de tener todos los materiales anteriores para el buffer TAE.
Si prefiere no tener que pagar por los materiales, se recomienda optar por hacer que el buffer fuera de su casa. Puede solicitar fácilmente los materiales que necesita en línea o visitar una tienda especializada para ellos.